RESUMO
Abstract Canine leishmaniasis (CanL) is a disease caused by Leishmania infantum. Serological methods are the most common diagnostic techniques used for the diagnosis of the CanL. The objective of our study was to estimate the sensitivity and specificity of one in-house ELISA kit (ELISA UNIZAR) and three commercially available serological tests (MEGACOR Diagnostik GmbH) including an immunochromatographic rapid test (FASTest LEISH®), an immunofluorescent antibody test (MegaFLUO LEISH®) and an enzyme-linked immunosorbent assay (MegaELISA LEISH®), using latent class models in a Bayesian analysis. Two hundred fifteen serum samples were included. The highest sensitivity was achieved for FASTest LEISH® (99.38%), ELISA UNIZAR (99.37%), MegaFLUO LEISH® (99.36%) followed by MegaELISA LEISH® (98.49%). The best specificity was obtained by FASTest LEISH® (98.43%), followed by ELISA UNIZAR (97.50%), whilst MegaFLUO LEISH® and MegaELISA LEISH® obtained the lower specificity (91.94% and 91.93%, respectively). The results of present study indicate that the immunochromatographic rapid test evaluated FASTest LEISH® show similar levels of sensitivity and specificity to the quantitative commercial tests. Among quantitative serological tests, sensitivity and specificity were similar considering ELISA or IFAT techniques.
Resumo A leishmaniose canina (Lcan) é uma causada pela Leishmania infantum. Os métodos sorológicos são as técnicas diagnósticas mais utilizadas para o diagnóstico da leishmaniose canina. O objetivo do nosso estudo foi estimar a sensibilidade e a especificidade de um kit ELISA interno (ELISA UNIZAR) e de três testes sorológicos disponíveis comercialmente, feitos pelo mesmo fabricante (MEGACOR Diagnostik GmbH), incluindo um teste rápido imunocromatográfico (FASTest LEISH®), um teste de anticorpos imunofluorescentes (Megafluo LEISH®) e um ensaio de imunoabsorção enzimática (Megaelisa LEISH®), utilizando-se modelos de classe latentes numa análise bayesiana. Foram incluídas duzentas e quinze amostras de soro. A maior sensibilidade foi alcançada para Fastest LEISH® (99,38%), ELISA UNIZAR (99,37%), Megafluo LEISH® (99,36%) seguida por Megaelisa LEISH® (98,49%). A melhor especificidade foi obtida por FASTest LEISH® (98,43%), seguida por ELISA UNIZAR (97,50%), enquanto Megafluo LEISH® e Megaelisa LEISH® obtiveram a menor especificidade (91,94% e 91,93%, respectivamente). Os resultados do presente estudo indicam que o teste rápido imunocromatográfico, avaliado por FASTest LEISH® mostra níveis similares de sensibilidade e especificidade aos testes comerciais quantitativos incluídos. Entre os testes sorológicos quantitativos, a sensibilidade e a especificidade foram semelhantes, considerando-se as técnicas de ELISA ou IFI.
Assuntos
Animais , Cães , Testes Sorológicos/normas , Leishmaniose/diagnóstico , Leishmaniose/veterinária , Leishmania infantum/imunologia , Doenças do Cão/diagnóstico , Análise de Classes Latentes , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/normas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Testes Sorológicos/veterinária , Anticorpos Antiprotozoários/sangue , Teorema de BayesRESUMO
Abstract In Brazil, Leishmania infantum mainly affects humans and dogs. The state of Bahia presents many dogs that are positive for this parasite. Despite the importance of epidemiology in this region, there are still very few studies that have assessed the genetic characteristics of L. infantum. The aim of this study is to investigate the genetic variability of L. infantum isolated identified in naturally infected dogs, in order to verify occurrence of subpopulation of this parasite in the different biomes existing in the state of Bahia. Thirty-two samples of L. infantum were analyzed, which were obtained isolated in dogs from the Mata Atlântica (rainforest), Caatinga (semi-arid scrub forest), and Cerrado (a vast tropical savannah eco-region) Bahia municipalities' biomes. All animals presented with clinical changes suggestive of Leishmania spp. and they exhibited positive reactions to serological tests. kDNA analysis with RFLP markers revealed the presence of genetic variability and gene flow in subpopulations of L. infantum; samples from the Mata Atlântica areas were genetically more similar to those from the areas of Caatinga and they were less likely to resemble those of the Cerrado. This data may be used to investigate the dissemination of parasite in the canine population of state of Bahia.
Resumo No Brasil a Leishmania infantum afeta principalmente o homem e os cães. O estado da Bahia apresenta elevado número de cães positivos por este parasito. Apesar da importância epidemiologia para a região, ainda há poucos estudos que avaliam as características genéticas de L. infantum. Objetivou-se com este estudo investigar a variabilidade genética de cepas de L. infantum identificadas em cães naturalmente infectados, a fim de verificar a ocorrência de sobpopulações do parasito nos diferentes biomas existentes no estado da Bahia. Foram analisadas 32 amostras de L. infantum isoladas em cães de municípios baianos distribuídos nos biomas Mata Atlântica, Caatinga e Cerrado. Todos os animais apresentavam alterações clínicas sugestivas de Leishmania spp. e reação positiva em exames sorológicos. A análise do kDNA com marcadores RFLP revelaram a presença de variabilidade genética e fluxo gênico nas subpopulações de L. infantum sendo que as amostras das áreas de Mata Atlântica foram geneticamente mais semelhantes as das áreas de Caatinga e foram mais distantes daquelas oriundas do Cerrado. Estas informações podem auxiliar em investigações de dispersão do parasito na população canino do Estado da Bahia.
Assuntos
Animais , Cães , Variação Genética , Leishmania infantum/genética , Doenças do Cão/parasitologia , Leishmaniose Visceral/veterinária , BrasilRESUMO
Different parasites that commonly occur concomitantly can influence one another, sometimes with unpredictable effects. We evaluated pathological aspects of dogs naturally co-infected with Leishmania infantum and Ehrlichia canis. The health status of the dogs was investigated based on histopathological, hematological and biochemical analyses of 21 animals infected solely with L. infantum and 22 dogs co- infected with L. infantum and E. canis. The skin of both groups showed chronic, predominantly lymphohistioplasmacytic inflammatory reaction. The plasmacytosis in the lymphoid tissues was likely related with the hypergammaglobulinemia detected in all the dogs. The disorganization of extracellular matrix found in the reticular dermis of the inguinal region and ear, characterized by the substitution of thick collagen fibers for thin fibers, was attributed to the degree of inflammatory reaction, irrespective of the presence of parasites. In addition, the histopathological analysis revealed that twice as many dogs in the co-infected group presented Leishmania amastigotes in the ear skin than those infected solely with Leishmania, increasing the possibility of becoming infected through sand fly vectors. Our findings highlight the fact that the health of dogs infected concomitantly with L. infantum and E. canis is severely compromised due to their high levels of total plasma protein, globulins, alkaline phosphatase and creatine kinase, and severe anemia.
A infecção simultânea por parasitas de diferentes espécies pode resultar em alterações imprevisíveis. O presente estudo avaliou a patologia de cães naturalmente coinfectados por Leishmania infantum e Ehrlichia canis. A saúde dos cães foi investigada pelas análises histopatológicas, hematológicas e bioquímicas de 21 cães infectados somente por L. infantum e 22 cães coinfectados por L. infantum e E. canis. Observou-se uma reação inflamatória crônica, predominantemente linfohistioplasmocítica, na pele dos dois grupos. A plasmocitose, encontrada nos tecidos linfóides, provavelmente estava relacionada com a hipergamaglobulinemia observada em todos os cães amostrados. A desorganização da matriz extracelular da derme da região inguinal e da orelha, demonstrada pela substituição das fibras de colágeno espessas por fibras finas, foi relacionada com o grau de reação inflamatória, independente da presença de parasitas. Ainda, observamos duas vezes mais animais do grupo coinfectado apresentando formas amastigotas na pele de orelha pela histopatologia comparado ao número de cães infectados apenas por Leishmania, tornando-os desta forma mais infectivos aos vetores. Nossos resultados ressaltam que a saúde de cães coinfectados estava severamente comprometida devido aos altos níveis de proteína plasmática total, globulinas, fosfatase alcalina, creatina quinase e anemia acentuada.
Assuntos
Humanos , Ciclina D1/genética , Genes Supressores de Tumor , Ligases/genética , Proteínas Supressoras de Tumor , Ubiquitina-Proteína Ligases , Doença de von Hippel-Lindau/genética , Northern Blotting , Carcinoma de Células Renais/genética , Perfilação da Expressão Gênica , Regulação Neoplásica da Expressão Gênica , Neoplasias Renais/genética , Análise de Sequência com Séries de Oligonucleotídeos , Oxigênio/farmacologia , Transfecção , Células Tumorais Cultivadas , Proteína Supressora de Tumor Von Hippel-LindauRESUMO
The increasing use of nanotechnologies in advanced therapies has allowed the observation of specific adverse reactions related to nanostructures. The toxicity of a novel liposome formulation of meglumine antimoniate in dogs with visceral leishmaniasis after single dose has been investigated. Groups of 12 animals received by the intravenous route a single dose of liposomal meglumine antimoniate (group I [GI], 6.5 mg Sb/kg), empty liposomes (GII) or isotonic saline (GIII). Evaluation of hematological and biochemical parameters showed no significant changes 4 days after administration. No undesired effects were registered in the GIII. However, adverse reactions were observed in 67.7% of dogs from both groups that received liposomal formulations. The side effects began moments after bolus administration and disappeared during the first 15 minutes after treatment. Prostation, sialorrhea and defecation were the most frequent clinical signs, registered in 33.3% and 41.6 % of animals from the groups GI and GII, respectively. Tachypnea, mydriasis, miosis, vomiting and cyanosis were also registered in both groups. The adverse reactions observed in this study were attributed to the activation of the complement system by lipid vesicles in a phenomenon known as Complement Activation-Related Pseudoallergy (CARPA). The influence of the physical-chemical characteristics of liposomal formulation in the triggering of CARPA is discussed.
O crescente uso das nanotecnologias nas terapias avançadas tem permitido a observação de reações adversas específicas relacionadas às nanoestruturas. A toxicidade de uma nova formulação lipossomal de antimoniato de meglumina após dose única foi avaliada em cães com leishmaniose visceral. Grupos de 12 animais receberam por via intravenosa uma dose única de antimoniato de meglumina lipossomal (grupo I [GI], 6,5 mg Sb/kg), lipossomas vazios (GII) ou solução salina isotônica (GIII). A avaliação de parâmetros hematológicos e bioquímicos não revelou alterações significativas quatro dias após a administração. Nenhum efeito indesejável foi registrado no GIII. No entanto, reações adversas foram observadas em 67,7% dos cães de ambos os grupos que receberam formulações lipossomais. Os efeitos colaterais iniciaram momentos após a administração em "bolus" e desapareceram no decurso dos primeiros 15 minutos após o tratamento. Prostração, sialorréia e defecação foram os sinais clínicos mais frequentes, registrados em 33,3% e 41,6% dos animais dos grupos GI e GII, respectivamente. Taquipnéia, midríase, miose, vômitos e cianose também foram registrados em ambos os grupos. As reações adversas observadas neste trabalho foram atribuídas à ativação do sistema complemento pelas vesículas lipídicas em fenômeno conhecido como Pseudoalergia Relacionada à Ativação do Complemento (PARAC). A influência das características físico-químicas da formulação lipossomal no desencadeamento de PARAC é abordada.